復旦大學附屬中山醫院樊嘉院士、柯愛武副研究員、蔡加彬博士領銜的研究團隊發現，對PD-1抑制劑有耐藥性的肝細胞癌（HCC）上調表達轉錄因子ZFP64，隨后ZFP64被蛋白磷酸化酶Cα（PKCα）活化，從而促進巨噬細胞集落刺激因子1（CSF1）表達；而CSF1又會招募并促進巨噬細胞極化為促癌的M2表型，導致HCC的免疫逃逸并對PD-1抑制劑產生耐藥。使用蛋白激酶抑制劑G?6976或侖伐替尼，可阻斷PKCα/ZFP64/CSF1軸，恢復HCC對PD-1抑制劑的敏感性。（J Hepatol. 2022年2月24日在線版 DOI：10.1016/j.jhep.2022.02.019）

為了探討對PD-1抑制劑治療耐藥HCC的特征，研究者選取10例接受PD-1抑制劑治療后疾病進展、7例部分緩解的患者肝臟活檢樣本進行了NGS測序。分析發現，ZFP64在疾病進展患者腫瘤組織中顯著上調表達。在小鼠原位腫瘤模型中，若腫瘤細胞過表達ZFP64，則小鼠腫瘤生長更迅速，對PD-1抑制劑治療反應更差。

在驗證隊列中，研究者發現ZFP64在腫瘤中顯著上調，且ZFP64表達與腫瘤內浸潤淋巴細胞的數量呈反比，ZFP64水平高與患者預后不良相關，提示ZFP64可能是引起HCC免疫逃逸以及PD-1抑制劑耐藥的關鍵因素。

為了在體內環境探究ZFP64對腫瘤發生發展的影響，研究者使用一種能自發肝細胞癌的HBV轉基因小鼠模型。實驗結果顯示，若使小鼠肝細胞過表達ZFP64，則HCC發生率、生長速度、轉移率均顯著增加。

對腫瘤微環境進行分析發現，腫瘤中巨噬細胞明顯增多，主要是促癌的M2巨噬細胞；CD4+T以及CD8+T細胞顯著減少。說明ZFP64可促進腫瘤的發生發展，且誘導形成免疫抑制性的腫瘤微環境。

研究者將巨噬細胞與ZFP64hi HCC細胞共培養，發現這可促使巨噬細胞上調表達CD206、CD163 和Arg1等M2巨噬細胞的標志物，同時還上調表達免疫抑制細胞因子IL-10和TGF-β1；共培養后的巨噬細胞可強烈地抑制T細胞增殖與活化。

趨化實驗還發現ZFP64hi HCC促進巨噬細胞的趨化募集，提示ZFP64hi HCC可通過誘導巨噬細胞M2極化和促進巨噬細胞趨化募集兩種機制，增加腫瘤內M2巨噬細胞數量。

因ZFP64是一種轉錄因子，或是它調控了某種重要基因表達，以此調控巨噬細胞。為證實這一猜測，研究者通過RNA測序及ChIP-seq技術結合細胞系實驗，尋找ZFP64的靶基因，最終發現ZFP64可促進CSF1的轉錄激活。

研究者通過共培養實驗發現，敲低腫瘤細胞的CSF1后，巨噬細胞的Arg1、IL-10和TGF-β1表達水平顯著降低，且趨化運動也減少，提示ZFP64通過激活CSF1的轉錄，從而促進巨噬細胞的招募與M2極化。

研究者探究了ZFP64活性的調控機制，發現PKCα可磷酸化ZFP64第226位絲氨酸，從而促進ZFP64核定位與轉錄激活能力，PKCα、ZFP64和CSF1組成了一個完整的免疫逃逸信號軸。對臨床隊列的回顧性研究發現，HCC患者PKCα/ZFP64/CSF1軸的激活與不良預后相關，且與PD-1抑制劑治療效果呈現負相關。

研究者嘗試使用PKCα抑制劑G?6976抑制這條信號軸發現，G?6976單藥治療就可抑制腫瘤生長，并改善腫瘤免疫微環境。若將G?6976與PD-1抑制劑聯用，則可取得更好療效。更重要的是，研究者發現使用已獲批的多激酶抑制劑侖伐替尼與PD-1抑制劑聯用，也能顯著改善治療效果。

既然CSF1是PKCα/ZFP64/CSF1軸的最終效應因子，那么抑制CSF1信號是否能發揮很好的效果？為了探討這一可能性，研究者使用CSF1R抑制劑BLZ945對荷瘤小鼠進行治療，發現單用BLZ945就能很好的抑制腫瘤生長，若將其與PD-1抑制劑聯用，則可極大地改善PD-1抑制劑的療效。

該研究揭示了在HCC中一種前所未知的PD-1抑制劑耐藥機制，為預測PD-1抑制劑療效提供了指標。研究發現使用已獲批的侖伐替尼與PD-1抑制劑聯合使用可克服耐藥提高療效，有非常重要的臨床參考價值。（編譯 胡靜）

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來源：全球腫瘤快訊